无毒型蛋白快速染色试剂盒

产品货号：

GS1479

中文名称：

无毒型蛋白快速染色试剂盒

英文名称：

产品规格：

10T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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常用的考马斯亮蓝R-250灵敏度较低，需要的染色时间较长，而普通的银染灵敏度高，但是过程比较烦琐，染色效果受水质和试剂纯度的影响比较大，染色液不容易保存。本试剂采用含有单一考马斯亮蓝G-250的染色液，形成的胶体状染色液不含有刺激性的甲醇和冰醋酸，安全无毒，该染色液只与蛋白结合，而与胶的结合程度低，不需要固定和脱色，只需要简单的水洗步骤。产生的蛋白条带容易观察，具有背景低、灵敏度高、实验便捷等特点。在常规染色程序中，当条带蛋白量大于200ng时可以随时观察染色条带出现的情况，30ng的蛋白条带在30min染色和水洗后可见；而最低能够检测出10ng左右的蛋白条带，则可以在1h左右完成(对蛋白的表达量要求较高)，该染色液也可以使用微波炉进行15min左右的快速染色，同时还适用于印迹膜上蛋白条带的快速染色。该染色液可以用于SDS-PAGE胶、Native-PAGE胶、NuPAGE胶、IEF胶或2D胶等，可以染10块胶(6×8cm)。

组分	规格
染色液	200mL
说明书	1份

保存：常温，有效期2年。

注意事项

由于该染色液是胶体状悬浊液，液体中含有一些悬浮的颗粒，请在使用前将胶体状染色液瓶上下颠倒同时用手涡旋摇动混匀，使之形成均一的溶液。
本试剂盒所配的染色液和蒸馏水的量是针对80×60×1mm凝胶而定，若凝胶较大，可适当增加染色液的量和使用合适大小的染色盘，以便完全浸没凝胶。
产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
在常规的染色程序步骤1中，需要充分的清洗以去除胶中的SDS，为防止SDS对染色的干扰，也可以将蒸馏水清洗凝胶的时间延长到每次10min。
如果用于IEF胶，请将胶用20% TCA进行固定30min，用蒸馏水冲洗凝胶三次，每次10min，以去除TCA，再进行常规的染色程序步骤2。
使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
显色的凝胶可以在蒸馏水中保存一个月而不会产生褪色，可以方便地进行拍照和保存。
用过的染色液可以再使用2～3次，但是灵敏度会明显降低。
染色30min后，经过蒸馏水清洗，30ng蛋白质条带出现，如果要增加灵敏度，则需要延长染色时间1~2h以上，同时也可以染色过夜，但是背景不会明显增加。
由于该染色液含有的是考马斯亮蓝G-250染料，因此用该染色液染色的印迹膜不适合于N端测序。
本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

常规的染色程序：
- 取出电泳后的SDS-PAGE胶，将胶放在合适大小的染色盘中，用20mL蒸馏水在摇床上清洗凝胶三次，每次5min左右。
  ● 如果使用的是Native-PAGE胶，只需要用蒸馏水冲洗凝胶一次5min左右。如果使用的NuPAGE胶，则需要用含50%甲醇和7%醋酸的固定液固定15min，再用蒸馏水冲洗凝胶三次，每次5min左右，以便去除固定液，同时染色液也可以方便地渗入到胶中，增加染色的灵敏度。
  ● 如果蛋白含量低于100ng，则需要用含50%甲醇和7%醋酸的固定液固定15min，再用蒸馏水冲洗凝胶三次，每次5min左右，以便去除固定液，同时染色液也可以方便地渗入到胶中，增加染色的灵敏度。
- 倒掉蒸馏水，加入20mL染色液，置于摇床上，震荡染色1~2h。
- 倒掉染色液，用20mL蒸馏水摇床上清洗凝胶2～3次，每次震荡清洗10min左右，这时蛋白条带会更加清晰，可以看到蛋白蓝色条带，再加入20mL蒸馏水将凝胶保存。
  ● 增加水洗的时间和次数可以增加染色的灵敏度。
  ● 水洗脱色如想要得到低背景凝胶，建议染色时间控制在30min左右，不易过长并适当延长水洗脱色时间。
  ● 如进一步缩短脱色时间，建议将脱色液更换为甲醇，醋酸脱色液脱色。
- 拍照分析实验结果。
微波炉法染色程序
以下程序对于1mm厚的小胶在15min内可以得到很好的效果，尽管灵敏度稍微有点降低(25ng左右)，如果使用的胶较厚较大，则需要增加使用的染色液和蒸馏水的量，同时相应增加微波炉上加热的时间。
- 取出电泳后的聚丙烯酰胺凝胶，将胶放在合适大小的染色盘中，加入50mL蒸馏水，在微波炉上加热45sec，倒去蒸馏水，再加入50mL蒸馏水，在微波炉上加热45sec，倒去蒸馏水，最后加入50mL蒸馏水，在摇床上清洗凝胶5min左右。
- 倒去蒸馏水，加入20mL染色液，在微波炉上加热30sec左右或者直到染色液刚开始沸腾，再在摇床上震荡染色5min左右。
  ● 需要随时观察微波炉加热的情况，以防止过度加热导致胶溶化和沸腾导致的染色液挥发。
- 倒掉染色液，用20mL蒸馏水摇床上清洗凝胶两次，每次震荡清洗5min左右，这时蛋白条带会更加清晰，可以看到蛋白蓝色条带，再加入20mL蒸馏水将凝胶保存。
  ● 增加水洗的时间和次数可以使得条带更加明显。
  ● 如进一步缩短脱色时间，建议将脱色液更换为甲醇，醋酸脱色液脱色。
印迹膜上蛋白染色程序
- 将转印后的干燥或潮湿的NC膜在双蒸水中清洗1～2min，如果是干燥的PVDF，请在甲醇中浸泡数分钟，然后再浸泡在双蒸水中。
- 加入10mL染色液，置于摇床上，震荡染色2～5min。
- 用含50%甲醇和1%醋酸的脱色液脱色4～10min，重复2～3次，可以看到25ng左右的蛋白条带。
  ● 如果需要将膜干燥保存，请将脱色后的膜放置在10%甲醇溶液中清洗1～2min，以防止膜起皱纹。

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